沙眼衣原体实验室检测一

沙眼衣原体（chlamydiatrachomatis,CT）泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见、并发症众多、迁延难治、缺乏有效疫苗、疗效欠佳的性传播疾病，发病率呈逐年增长的态势，在一些国家和地区已居于性传播疾病的首位。今天我们就来讲讲CT的实验室检查。

CT的实验室检查包括病原学方法和非病原学方法。病原学方法包括衣原体直接镜检、衣原体培养、衣原体抗原检测（免疫层析法、酶联免疫法和直接免疫荧光法）、衣原体核酸检测（包括核酸探针杂交和PCR）；非病原学方法包括衣原体抗体检测（用衣原体抗原检测血中特异的衣原体抗体）、组织病理，然而组织病理在临床较少使用。美国食品和药品管理局已正式通过PCR在衣原体实验诊断中的应用，甚至把它作为衣原体实验室诊断新的金标准之一。

一、临床标本的衣原体直接镜检CT可在敏感细胞中增殖，在细胞中形成包涵体。用拭子搽落或白金耳刮落含有包涵体的黏膜细胞直接涂片，做Giemsa染色或碘染色，如发现有一定数量的具有特征性的包涵体则可作出诊断。此法简便易行，但仅适用于新生儿眼结膜炎刮片的检查，对泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断不够敏感。

二、直接免疫荧光试验（directimmunofluorescence,DIF）已有15种血清型的衣原体主要外膜蛋白制成单克隆抗体，并用荧光素做标记。当标本中存在衣原体时，针对沙眼衣原体主要外膜蛋白或脂多糖的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体（图1）。此法诊断沙眼衣原体感染的敏感性为70%~90%，特异性为83%~99%。由于有可能将某些发光颗粒（白细胞、上皮细胞、色素颗粒）、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体，因此此法对于实验人员的技术水平要求较高。

直接免疫荧光法的优点:快速，价廉，操作简便，30~40min即可出结果。标本的贮存和运送方便，标本中的沙眼衣原体不必是存活的或是有感染性的。由于已经有商品化的试剂盒供应，因而方便了使用。因而有些实验室将它和衣原体培养并列为扩大的金标准。

缺点是在低感染率的人群中敏感性差，受实验人员的主观影响大。它最适宜用来检测沙眼衣原体高流行率人群（如性病门诊病人）。

三、酶联免疫吸附试验先将处理过的固相载体（微孔或珠子）和标本一起孵育，如标本中含有衣原体，即可吸附于固相载体上。把未结合的物质洗去后，再将固相载体与抗衣原体抗体结合，然后再加入含有辣根过氧化物酶的抗体（二抗），二抗能与固相载体上的抗原抗体复合物发生反应。然后再加入底物和邻苯二胺溶液，酶能将其氧化成桔黄色，颜色的深浅和抗原的量成正比，颜色可用酶标仪测出，当标本的吸收值大于或等于阈值时则视标本中含有CT。

此法的一个显著优点是自动化程度高，可同时检测大批量标本，敏感性较高（67%~90%），特异性强（92%~97%），阳性预期值基本可靠（32%~87%）。用仪器判定结果，结果较为客观。最适宜用来检测沙眼衣原体高流行率人群。在低流行率的人群中应用时，解释结果宜慎重。

四、乳胶（金标）免疫扩散（层析法）：该法是将附有衣原体单抗的乳胶颗粒（胶体金）复合物吸附于滤纸上，将滤纸夹在两块塑料板中间。如加入的标本中含有衣原体抗原，则标本中的抗原与结合有乳胶（胶体金）的单抗结合。复合物由于毛细作用向前扩散移动，在结果窗中与二抗结合作用出现一条红线，标本即为阳性。本试验敏感性为87%，特异性为98.8%。试验方法简单，出结果快。但敏感性较差，标本需要有一定量的抗原，抗原含量低时可出现假阴性。